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摘要:豬圓環(huán)病毒病是危害全球養(yǎng)豬業(yè)的重大經(jīng)濟(jì)影響性疾病之一,長(zhǎng)期以來(lái)以PCV2感染為主要病原,近年來(lái)PCV3感染病例不斷出現(xiàn),使病情更趨復(fù)雜,給防控帶來(lái)巨大挑戰(zhàn)。
研究表明,PCV3是新發(fā)現(xiàn)的一種豬圓環(huán)病毒,感染后會(huì)導(dǎo)致豬群出現(xiàn)呼吸、消化等多系統(tǒng)炎癥和免疫、繁殖系統(tǒng)障礙,進(jìn)而引起嚴(yán)重的混合感染和繼發(fā)感染等,進(jìn)一步加劇豬場(chǎng)健康問(wèn)題,嚴(yán)重影響生產(chǎn)性能和經(jīng)濟(jì)效益。目前PCV3在國(guó)內(nèi)外呈流行趨勢(shì),對(duì)養(yǎng)豬業(yè)危害甚大。本文綜述了PCV3的發(fā)現(xiàn)、檢測(cè)及流行等情況,旨在為進(jìn)一步防控該病提供有益參考。
關(guān)鍵詞:豬圓環(huán)病毒3型感染;檢測(cè)診斷;流行與控制
豬圓環(huán)病毒病是危害全球養(yǎng)豬業(yè)的重大經(jīng)濟(jì)影響性疾病之一,長(zhǎng)期以來(lái)以PCV2感染為PCVD的主要病原,近年來(lái)PCV3感染病例不斷出現(xiàn),使病情變得更趨復(fù)雜,給防控帶來(lái)巨大的挑戰(zhàn)。
近年來(lái)研究表明,PCV3存在多種基因型,不同基因型間的致病性和免疫原性存在顯著差異,該病毒可通過(guò)水平傳播和垂直傳播在豬群中不斷擴(kuò)散,導(dǎo)致混合感染和繼發(fā)感染,進(jìn)一步加劇豬場(chǎng)健康問(wèn)題。因此,強(qiáng)化PCV3的研究和防控,對(duì)保障養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展具有重要意義。
1 PCV3呈現(xiàn)全球性傳播流行趨勢(shì)
豬圓環(huán)病毒?。?/span>porcine circovirus diseases,PCV)是由圓環(huán)病毒引起的一種多系統(tǒng)性疾病,包括斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)、豬皮炎和腎病綜合征(PDNS)、增生性壞死性肺炎(PNP)和繁殖障礙性疾病等,主要表現(xiàn)為呼吸、泌尿、腸道、淋巴、心血管、神經(jīng)、生殖系統(tǒng)以及皮膚的功能紊亂,同時(shí)可導(dǎo)致免疫抑制,進(jìn)而導(dǎo)致混合感染或繼發(fā)感染,對(duì)全球養(yǎng)豬業(yè)危害巨大。
圓環(huán)病毒屬于圓環(huán)病毒科(circoviridae)圓環(huán)病毒屬(circovirus)成員,迄今為止已發(fā)現(xiàn)有4種基因型,即PCV1~PCV4。PCV1于1974年被首次報(bào)道,該病毒對(duì)豬無(wú)致病性。PCV2于1996年被發(fā)現(xiàn),可導(dǎo)致豬群多系統(tǒng)疾病,是PCVD的主要病原。 2010年,PCV3在波蘭首次被發(fā)現(xiàn),2015年在美國(guó)豬場(chǎng)發(fā)病被正式確認(rèn),隨后全球不少?lài)?guó)家和地區(qū)陸續(xù)有PCV3感染報(bào)道,近年來(lái)呈現(xiàn)逐漸流行趨勢(shì)。
在國(guó)內(nèi),2016年華中農(nóng)大何啟蓋教授研究團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)在遼寧、江西、重慶三個(gè)農(nóng)場(chǎng)的356頭母豬出現(xiàn)繁殖障礙、新生仔豬死亡率驟升等問(wèn)題。采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)了繁殖障礙、腹瀉等相關(guān)的豬瘟、豬偽狂犬等多種常見(jiàn)病原,僅PCV3呈陽(yáng)性,這被認(rèn)為系我國(guó)PCV3感染的首次報(bào)道。隨后該團(tuán)隊(duì)進(jìn)一步對(duì)安徽、重慶、福建、河南等11個(gè)省市的臨床樣品檢測(cè)發(fā)現(xiàn),豬場(chǎng)PCV3陽(yáng)性率為68.6%(24/35),個(gè)體陽(yáng)性率為34.7%(77/222)。同年Shen等人在我國(guó)南方某豬場(chǎng)臨床表現(xiàn)為厭食、高熱、黃疸和腹式呼吸的仔豬組織和血清中檢測(cè)到PCV3,且PCV2、PRRSV和PRV為陰性。
2021年,河南農(nóng)大張改平院士團(tuán)隊(duì)評(píng)估了患有嚴(yán)重水樣腹瀉病的仔豬腸道樣本中PCV2、PCV3和PEDV的共感染狀態(tài),結(jié)果顯示PCV2、PCV3和PEDV存在非常高的混合感染率,PCV2與PCV3混合感染與保育豬的腸道臨床疾病有關(guān)。Zhai等、Zhang等在廣東、江西等發(fā)生腹瀉的豬場(chǎng)發(fā)現(xiàn)了同樣的現(xiàn)象,即PCV3在腹瀉的哺乳仔豬和斷奶仔豬中廣泛傳播。
2021年,湖南農(nóng)大王乃東研究團(tuán)隊(duì)基于2016—2018年在7個(gè)豬場(chǎng)中收集到的血清樣本中調(diào)查研究了湖南豬場(chǎng)樣本中PPV7和PCV3之間的共感染情況。研究結(jié)果顯示,PCV3陽(yáng)性的流產(chǎn)胎兒樣本中PPV7陽(yáng)性率較高,兩種病毒混合感染會(huì)加重母豬繁殖障礙病情。此后,山東、廣西、新疆等地的獸醫(yī)技術(shù)人員,也在相關(guān)發(fā)病豬場(chǎng)相繼檢出PCV3。
據(jù)報(bào)道,近年來(lái)PCV3在全球廣泛傳播,已成為世界性流行豬病,目前全國(guó)絕大部分省(市、區(qū))豬群也存在PCV3感染,陽(yáng)性率呈現(xiàn)逐年上升趨勢(shì),而且以混合感染、繼發(fā)感染居多,使病情變得更趨復(fù)雜,嚴(yán)重影響豬場(chǎng)生產(chǎn)性能和經(jīng)濟(jì)效益,給防控工作帶來(lái)巨大的挑戰(zhàn)。
2 流行病學(xué)與臨床癥狀
PCV3病毒粒子呈圓形,無(wú)囊膜,直徑13~25 nm,屬于共價(jià)閉合環(huán)狀單鏈DNA基因組結(jié)構(gòu),具有高度的抵抗力。研究表明,PCV3與PCV1和PCV2在基因組結(jié)構(gòu)和蛋白序列上存在明顯差異,不同基因型間的致病性和免疫原性也不同,屬于新型的豬圓環(huán)病毒。
PCV3可以通過(guò)多種途徑傳播,包括直接接觸、空氣、飼料和飲水等。母豬是PCV3的主要儲(chǔ)存宿主,病毒可以在其體內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間存在,并通過(guò)胎盤(pán)垂直傳播給仔豬。仔豬在出生后不久即可能感染PCV3,因此,斷奶后仔豬的感染率較高。PCV3感染后,豬只的免疫系統(tǒng)會(huì)受到損害,使得它們更容易受到其他病原體的侵襲。
流行病學(xué)調(diào)查表明,該病毒在全球范圍內(nèi)廣泛存在,尤其是在規(guī)?;i場(chǎng)感染率較高,可通過(guò)水平和垂直方式進(jìn)行廣泛擴(kuò)散傳播。該病毒對(duì)溫度和消毒藥物有一定的抵抗力,在豬舍內(nèi)可存活數(shù)月。在規(guī)?;i場(chǎng)中,飼養(yǎng)密度過(guò)大、通風(fēng)不良、消毒不徹底等因素,均可能加劇其傳播與流行。
PCV3具有較強(qiáng)的易感性,各階段豬群均可感染,但對(duì)母豬、仔豬的危害最為嚴(yán)重。病毒在豬體內(nèi)的分布范圍也很廣泛,表現(xiàn)出極強(qiáng)的組織嗜性,在心、肝、脾、肺、腎、腦、淋巴結(jié)、扁桃體以及血清、乳汁、胸腔積液、腹腔液、唾液、糞便和精液等幾乎所有組織和體液中均可檢出。國(guó)內(nèi)外學(xué)者在狗、牛、驢、小鼠、盤(pán)羊、鹿、羚羊、蜱等動(dòng)物上均檢出了PCV3,即該病毒可能具有跨物種傳播的能力,對(duì)養(yǎng)豬業(yè)和其他動(dòng)物構(gòu)成嚴(yán)重威脅。
一般來(lái)說(shuō),PCV3臨床癥狀與PCV2相似,感染后的豬只極易形成免疫抑制,降低對(duì)疾病的抵抗力,從而引起多系統(tǒng)疾病和綜合征。比如,母豬感染會(huì)導(dǎo)致生殖機(jī)能下降,引起流產(chǎn)、死胎和木乃伊胎;仔豬感染會(huì)導(dǎo)致心臟和多系統(tǒng)炎癥、呼吸系統(tǒng)疾病、斷奶仔豬腹瀉、新生仔豬先天性震顫、豬皮炎和腎病綜合征(PDNS)和斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)等;對(duì)于育肥豬,癥狀可能不明顯,會(huì)表現(xiàn)出厭食、發(fā)燒、咳嗽、生長(zhǎng)遲緩等慢性癥狀。
研究發(fā)現(xiàn),臨床中PCV3單一感染陽(yáng)性率較高,但主要以混合感染為主,如PCV2、PRRSV、PEDV、PPV、豬細(xì)小病毒、豬博卡病毒等,提示這幾種病原在感染致病過(guò)程中可能存在協(xié)同作用,即一種病毒誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖或免疫抑制,可增強(qiáng)對(duì)其他病毒復(fù)制和感染的易感性、致病性,導(dǎo)致生殖系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)疾病等病情明顯加重。
3 病理變化與檢測(cè)診斷
近年來(lái),越來(lái)越多的科研團(tuán)隊(duì)陸續(xù)提供了病毒與致病性相關(guān)的臨床和實(shí)驗(yàn)室證據(jù)。國(guó)內(nèi)外多位學(xué)者在繁殖障礙母豬及其死胎、木乃伊胎樣中檢出PCV3是唯一的病原體,證明該病毒與繁殖障礙相關(guān),同時(shí)可引起仔豬的多系統(tǒng)炎癥病變。
2019年,Jiang等在國(guó)際上首次利用反向遺傳技術(shù)拯救獲得PCV3病毒。為了評(píng)估PCV3的致病性,將PCV3毒株接種于4周齡無(wú)特定病原體仔豬鼻腔,觀察到了發(fā)熱、厭食、咳嗽、腹瀉、嗜睡、震顫以及皮膚和耳朵發(fā)紺、多灶性丘疹等類(lèi)似于PDNS疾病的典型癥狀與病理變化,在接種后28天的觀察期內(nèi),攻毒豬的死亡率為40%,在淋巴結(jié)、血清、肺臟、心臟、腎臟、脾臟、肝臟和小腸等各種組織和器官中均發(fā)現(xiàn)病理?yè)p傷和PCV3特異性抗原。
2020年,Juan等從繁殖障礙疾病的母豬及其所產(chǎn)死胎、木乃伊胎上采集的PCV3核酸陽(yáng)性病料經(jīng)處理后接種于PK-15細(xì)胞,并進(jìn)行傳代培養(yǎng),經(jīng)qPCR、IFA和原位雜交證實(shí)了病毒的有效增殖;用在細(xì)胞傳代的病毒接種CD/CD生長(zhǎng)豬,接種豬最早在7dpi次檢測(cè)到病毒血癥,在28dpi時(shí)在所有豬中均可檢測(cè)到PCV3病毒,同時(shí)接種豬表現(xiàn)出以心肌炎和全身性動(dòng)脈周?chē)诪樘卣鞯亩嘞到y(tǒng)炎癥導(dǎo)致的組織學(xué)病變。
2021年,新疆兩個(gè)集團(tuán)化豬場(chǎng)陸續(xù)發(fā)生較為嚴(yán)重的母豬繁殖障礙疾病,流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎率顯著升高,腦部、肺部剖解異常,脾臟有梗死。同批次存活的斷奶豬呈現(xiàn)典型的PMWS癥狀,發(fā)育緩慢、背骨突出、漸進(jìn)性消瘦,部分豬只耳朵發(fā)紺、最終脫水死亡,采樣檢測(cè)僅PCV3呈核酸陽(yáng)性。
2021年,哈爾濱獸研所蔡雪輝團(tuán)隊(duì)從發(fā)病豬的肺組織樣中分離獲得了在PK-15細(xì)胞上能夠傳代培養(yǎng)的PCV3 DB-1分離株,用低代次毒株經(jīng)鼻腔和肌肉注射人工感染CD/CD豬,PCV3病毒表現(xiàn)出廣泛的組織嗜性,在心、肝、脾、肺、腎、腦、淋巴結(jié)和扁桃體均可檢出。
由于PCV3與其他圓環(huán)病毒,如PCV2和 PCV1,在臨床上往往難以區(qū)分,為了準(zhǔn)確鑒別這三種病毒,實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)是關(guān)鍵。其中,病毒分離培養(yǎng)是傳統(tǒng)的診斷手段,通過(guò)采集感染豬只的組織樣本,如淋巴結(jié)、肺臟等,進(jìn)行病毒分離,培養(yǎng)出病毒顆粒,再通過(guò)電鏡觀察進(jìn)行確認(rèn)。然而,病毒分離培養(yǎng)過(guò)程復(fù)雜,周期較長(zhǎng),不適合急性感染病例的診斷。
免疫學(xué)檢測(cè)方法是檢測(cè)PCV3的重要手段之一。常用的方法包括酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)和免疫熒光試驗(yàn)(IFA)。ELISA檢測(cè)通過(guò)檢測(cè)豬只血清中的PCV3 抗體水平來(lái)判斷豬只是否感染,操作簡(jiǎn)便,成本較低,適合大規(guī)模篩查,從而區(qū)分不同圓環(huán)病毒感染;IFA檢測(cè)則是通過(guò)檢測(cè)豬只血清中的PCV3抗原來(lái)判斷豬只是否感染,具有較高的特異性和靈敏度,適用于疑似病例的確診。
分子生物學(xué)檢測(cè)是確診PCV3感染的金標(biāo)準(zhǔn)。常用的分子生物學(xué)檢測(cè)方法包括逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和實(shí)時(shí)熒光定量 PCR(qPCR)。RT-PCR檢測(cè)能夠快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)出 PCV3 病毒核酸,qPCR檢測(cè)則具有較高的靈敏度和特異性,可實(shí)現(xiàn)對(duì)PCV3病毒核酸的定量檢測(cè)。一項(xiàng)研究表明,在PCV3、PCV2和PCV1混合感染的情況下,RT-PCR檢測(cè)的準(zhǔn)確率可達(dá)95%以上。在規(guī)模化豬場(chǎng)中,分子生物學(xué)檢測(cè)通常作為確診PCV3感染的首選方法,并可用于監(jiān)測(cè)豬群中PCV3 的流行情況,為制定防控策略提供依據(jù)。
4 免疫預(yù)防與控制措施
豬圓環(huán)病毒病均是嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)的重大疾病,近年來(lái)在各地豬場(chǎng)陽(yáng)性率居高不下,而且毒株發(fā)生變異,臨床癥狀加重,往往會(huì)造成混合和繼發(fā)感染,引起暴發(fā)流行,造成重大損失。為了有效控制PCV3的傳播,需要采取綜合性的防控措施,包括提高飼養(yǎng)管理水平,建立完善的生物安全體系,強(qiáng)化免疫和保健預(yù)防,防止應(yīng)激反應(yīng),提高豬群免疫力,及時(shí)確診和對(duì)癥治療等。
嚴(yán)格引種檢疫,定期檢測(cè)監(jiān)控。防控PCV3感染必須從源頭抓起,嚴(yán)格實(shí)施檢測(cè)、隔離、淘汰、凈化措施干預(yù),嚴(yán)防隱性帶毒豬傳播。對(duì)擬引豬必須進(jìn)行頭頭檢測(cè),防止PCV3陽(yáng)性種豬入場(chǎng);同時(shí)對(duì)于入場(chǎng)豬只仍需隔離觀察,嚴(yán)格實(shí)施檢測(cè)程序,確定無(wú)問(wèn)題后才能入群。對(duì)本場(chǎng)自留種豬群,也要堅(jiān)持定期檢疫凈化,建立穩(wěn)定的健康豬群。
正確選擇疫苗,科學(xué)免疫接種。實(shí)施疫苗免疫是防控的最有效手段。針對(duì)豬圓環(huán)病毒病免疫,目前國(guó)內(nèi)外已有多種成熟疫苗應(yīng)用,如PCV2型滅活疫苗、亞單位疫苗、合成肽疫苗,也有與豬肺炎支原體或副豬聯(lián)合的二聯(lián)苗等;由于PCV2疫苗對(duì)PCV3尚無(wú)交叉保護(hù)效果,因此研發(fā)效果確實(shí)的PCV3疫苗成為當(dāng)務(wù)之急。據(jù)了解,目前國(guó)內(nèi)外已有PCV3疫苗上市,能有效減少病毒在豬群中的傳播,應(yīng)參考廠(chǎng)家提供的免疫程序嚴(yán)格實(shí)施免疫。
強(qiáng)化消毒滅源,確保生物安全。隨著規(guī)模養(yǎng)殖業(yè)蓬勃發(fā)展,飼養(yǎng)密度加大,市場(chǎng)流通交易頻繁,對(duì)豬場(chǎng)生物安全構(gòu)成巨大威脅。因此,堅(jiān)持“全進(jìn)全出”的飼養(yǎng)制度,搞好環(huán)境衛(wèi)生,保持圈舍清潔干燥,通風(fēng)良好;強(qiáng)化消毒滅源,特別是對(duì)于流產(chǎn)母豬,應(yīng)及時(shí)清除胎兒,嚴(yán)格產(chǎn)房和豬體消毒,對(duì)污染物和病死豬嚴(yán)格規(guī)范進(jìn)行無(wú)害化處置等,對(duì)阻斷傳播鏈條至關(guān)重要。
加強(qiáng)飼養(yǎng)管理,綜合保健預(yù)防,提高抗病力。提升豬場(chǎng)管理水平,保持合理飼養(yǎng)密度,提供生物發(fā)酵飼料,確保營(yíng)養(yǎng)均衡,保持舒適生活環(huán)境,可提高抗病力;同時(shí),針對(duì)性實(shí)施保健預(yù)防,如在飼料或飲水中定期添加黃芪多糖、電解多維、美益生等,可提高免疫力,降低應(yīng)激反應(yīng);此外,強(qiáng)化對(duì)豬繁殖與呼吸綜合征、豬流感、豬圓環(huán)病毒2型、偽狂犬病等病的免疫和控制,可降低PCV3的發(fā)生和帶來(lái)的損失。
及時(shí)確診,對(duì)癥施治。對(duì)于發(fā)病豬群,通過(guò)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè),快速確診,嚴(yán)格采取隔離、消毒、淘汰、凈化等措施,避免擴(kuò)散傳播。目前對(duì)該類(lèi)疾病尚無(wú)特效藥物治療方法,防控應(yīng)以抗病毒、減緩應(yīng)激、供給營(yíng)養(yǎng)、提高免疫力、改善生殖機(jī)能、控制混合或繼發(fā)感染、降低死亡率為原則。
對(duì)于母豬感染,生殖機(jī)能下降,出現(xiàn)流產(chǎn)、死胎和木乃伊胎者,每頭母豬肌注30%黃芪多糖注射液20-30毫升,每天1次,連用3天;在飼料中添加美益生(主要成分:左旋肉堿、蛋氨酸鋅、多維、葉酸、生物素等)用量為1000克/噸,連用7天;同時(shí),對(duì)于所有發(fā)病豬群,統(tǒng)一肌注白細(xì)胞干擾素,每天1次,連用3天,用量根據(jù)體重而定(2-10毫升);食欲廢絕者,及時(shí)靜注葡萄糖液和維生素、能量制劑,以補(bǔ)充體液和營(yíng)養(yǎng);能夠吃食者,在飲水中添加綠益態(tài)(主要成分:多種維生素、必需氨基酸、益生菌等),用量為800克/噸,讓豬自由飲用,以扶正驅(qū)邪,強(qiáng)力抗毒,緩解應(yīng)激,改善生殖機(jī)能。
對(duì)出現(xiàn)呼吸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)明顯癥狀的病豬,肌注復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉注射液,每天1次,連用3-5 天,用量為0.1毫升/公斤;同時(shí)在飼料中添加泰樂(lè)菌素+并可清(主要成分:黃芪多糖、甘草酸、桑白皮、苦杏仁等),連用7-10天,用量均為1000克/噸;在飲水中添加達(dá)安(主要成分:磺胺氯達(dá)嗪鈉、甲氧芐啶)連用7-10天,用量為500克/噸。
對(duì)體表出血性紅斑、關(guān)節(jié)腫脹、伴有腹瀉、血痢、血尿嚴(yán)重的仔豬,肌注10%鹽酸林可霉素+復(fù)合維生素B注射液,用量均為0.2毫升/公斤體重,每天1次,連用3-5天;在飼料中添加美安捷(主要成分:蒙脫石、釀酒酵母、微量元素)+板青顆粒(主要成分:板藍(lán)根、大青葉等),連用7天;用量均為1000克/噸;在飲水添加腸泰(主要成分:果寡糖等)+黃芪多糖電解多維,連用7-10天,用量均為1000克/噸,以清熱解毒,補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng),固本護(hù)腸,改善循環(huán)障礙,增強(qiáng)免疫功能,減少病毒復(fù)制傳播,減輕發(fā)病癥狀,控制混合或繼發(fā)感染,幫助危重豬渡過(guò)危險(xiǎn)期,降低死亡率。